LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI AKUATIK

LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI AKUATIK

SEMESTER GANJIL 2015/2016

KELAS B / PRODI MSP

OLEH :

UMBU DOMU WORA

NIM. 14380085

KELOMPOK I

FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN

UNIVERSITAS KRISTEN ARTHA WACANA

KUPANG

2015

1.    Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dalam pelaksanaan praktikum mikrobiologi akuatik ini yaitu :

1.      Mengetahui alat-alat yang digunakan dalam pengujian mikrobiologi dan mengerti cara-cara menggunakannya.

2.      Mengetahui alat dan cara sterilisasi alat dan bahan pada pengujian mikrobiologi.

3.      Mengetahui cara pengenceran pada pengujian mikrobiologi.

4.      Peserta dapat menguji kualitas air berdasarkan kehadiran bakteri E. coli.

2.    Alat dan Bahan Praktikum

2.1    Alat Praktikum

Adapun alat dan yang dipergunakan dalam melaksanakan praktikum ini, yaitu :

No.	Nama Alat	Fungsi	Gambar
1.	Pipet Ukur	Untuk mengukur larutan
2.	Erlenmeyer	Untuk pencampuran bahan dan larutan
3.	Gelas Ukur	Untuk mengukur bahan kimia (cair) dan larutan
4.	Bunsen	Untuk membakar pipet, jarum ose dan tabung reaksi pada pengujian kualitas air
5.	Cawan Petri	Untuk menumbuhkan bakteri
6.	Rubber Bulp	Membantu dalam pengambilan sampel menggunakan pipet
7.	Tabung Durham	Menganalisis pembentukan gas pada pengujian E. coli
8.	Jarum Ose	Untuk menggores sampel yang di ujikan
9.	Gelas Beaker 100 ml, 250 ml dan 600 ml	Untuk mengukur bahan dan larutan
10.	Pinset	Untuk menjepit sampel
11.	Rak Tabung Reaksi	Untuk menyimpan tabung reaksi
12.	Tabung Reaksi	Untuk menganalisis sampel
13.	Mortal dan Alu	Untuk menghaluskan sampel
14.	Pipet Tetes	Untuk mengambil sampel atau larutan
15.	Kaca Obyek	Untuk menyimpan sampel yang diamati
16.	Cover Glass	Untuk menutup sampel pada kaca obyek
17.	Oven	Untuk sterilisasi alat yang digunakan
18.	Hot Plate	Untuk sterilisasi media yang digunakan
19.	Mikroskop Binokuler	Untuk mengidentifikasi bakteri
20.	Inkubator	Untuk menginkubasi/menumbuhkan bakteri
21.	Autoklaf	Untuk mensterilkan alat dan bahan
22.	Laminary Air Flow	Untuk menginokulasi bakteri

2.2    Bahan Praktikum

Adapun bahan yang digunakan dalam melakukan pengujian kualitas air ini yaitu, antara lain :

No.	Nama Bahan	Fungsi	Gambar
1.	Sampel Air cuci pakaian	Sebagai bahan uji
2.	Lactos Broth	Sebagai media uji pendugaan pada bakteri
3.	Eosin Methylen Blue Agar	Sebagai media uji penguatan pada bakteri
4.	Alkohol 70%	Untuk mensterilkan alat pada pengujian
5.	Aquades	Sebagai bahan pencampur media
6.	NaCl	Sebagai bahan pencampur media

3.    Prosedur Kerja

1.    Siapkan alat-alat yang akan digunakan dalam pengujian.

2.    Alat-alat dicuci hingga bersih.

3.    Alat-alat yang telah dicuci disterilisasi dalam oven pada suhu 121°C.

4.    Setelah alat-alat sudah selesai disterilisasi kemudian didinginkan.

5.    Siapkan bahan-bahan Lactos Broth yang digunakan kemudian homogenkan menggunakan hot plate.

6.    Simpan Lactos Broth pada inkubator selama 1 x 24 jam.

7.    Air sampel diambil dilokasi yang telah ditentukan.

8.    Air sampel yang diambil dipindahkan ke tabung Erlenmeyer 250 ml.

9.    Gunakan pipet volumetrik/pipetor untuk mengambil sampel air laut kemudian pindahkan ke tabung reaksi yang telah diisi dengan aquades.

10. Setelah itu tutup kembali tabung reaksi menggunakan kapas dan bungkus dengan alumminium foil.

11. Masukan dalam inkubator dengan suhu 37°C selama 2 x 24 jam (48 jam).

4.    Hasil dan Pembahasan

Bakteri dianalisa mengunakan metode MPN (Most Probable Number). Metode ini bertujuan untuk mendeteksi apakah ada bakteri E. coli yang telah mengkontaminasi perairan dan hasil perikanan.

Cara pengujian menggunakan metode MPN dilakukan dengan cara siapkan media LB dengan perhitungan LB yang dibutuhkan untuk 9 tabung reaksi sebagai berikut :

LB yang dibutuhkan           = 9 x 8 mL LB

                                    = 72/1000 mL x 13 gr

                                    = 0,936 gr LB

            Setelah selesai perhitungan, kemudian ukur LB yang dibutuhkan. Campurkan LB dengan Aquades lalu homogenkan dengan menggunakan Hot Plate. Ambil LB sebanyak 8 ml lalu masukan LB kedalam masing-masing tabung reaksi. Setelah itu masukan tabung durham.

            Sterilisasi media LB menggunakan autoclaf dengan suhu 121°C selama 15 menit.

            Cara pengujian sampel air dilakukan dengan :

1.     Uji Pendugaan

Siapkan 3 grup tabung reaksi sebanyak 3 seri tabung lalu berikan label pada masing-masing tabung reaksi. Ambil sampel air dari dalam Erlenmeyer menggunakan pipetor sebanyak ±2 ml kemudian masukan dalam tabung reaksi pada group 1. Lakukan langkah tersebut pada semua tabung reaksi. Inkubasi menggunakan inkubator selama 48 jam dengan suhu 37°C.

Bakteri akan tumbuh pada media LB apabila media LB berwarna keruh dan menghasilkan gelembung udara sebanyak 2/3 tabung.

Pada praktikum, media LB yang digunakan dalam uji pendugaan bakteri tumbuh hanya pada tabung reaksi grup 1 dan grup 2 (positif E. coli) sedangkan untuk tabung grup 3 negatif E. coli. Sehingga didapati formasi tumbuh bakteri pada media uji LB, sebagai berikut :

Air Laut dibelakang Hotel Kristal              = 3.0.0

Air bekas Cucian                                         = 3.3.0

Air Laut dibelakang Hotel On The Rock  = 1.0.0

            Bakteri yang tumbuh pada media LB harus dilakukan pengujian lanjutan karena bakteri yang tumbuh belum tentu jenis E. coli namun bakteri Coliform. Uji lanjutan yang dilakukan yaitu uji penguatan untuk membuktikan jenis bakteri yang tumbuh pada media LB.

2.     Uji Penguatan

Siapkan media EMBA dengan perhitungan sebagai berikut :

EMBA yang dibutuhkan     = 45 mL /1000 mL x 36 gr

                                                = 1,62 gr EMBA

Ukur EMBA yang dibutuhkan kemudian homogenkan EMBA menggunakan hot plate, lalu tuang kedalam cawan petri dan diamkan hingga dingin.

Ambil bakteri pada uji pendugaan yang tumbuh pada media LB dengan menggunakan jarum ose yang sudah disterilkan dengan memanaskan pada lampu Bunsen. Kemudian gores pada media EMBA secara zig-zag. Setelah selesai melakukan penggoresan, lalu inkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C.

Hasil positif tumbuh bakteri E. coli apabila media EMBA berubah warna dengan karakteristik warna hijau atau merah metalik.

Pada saat pengujian bakteri yang tumbuh mengindikasikan hasil positif dengan karakteristik warna hijau dan metalik. Jumlah bakteri yang tumbuh pada media EMBA yaitu sebanyak :

10^-1     = 10 koloni

10^-2     = 3  koloni

10^-3     = 3  koloni

Formasi tumbuh bakteri pada setiap kelompok pengujian yaitu sebagai berikut :

Air laut dibelakang hotel kristal

10^-1     = 10 koloni

10^-2     = 25 koloni

10^-3     = 24 koloni

Air bekas cucian pakian

10^-1     = 10 koloni

10^-2     = 3  koloni

10^-3     = 3  koloni

Air laut dibelakang hotel on the rock

10^-1     = 4 koloni

10^-2     = 3 koloni

10^-3     = 3  koloni

Berdasarkan hasil pengujian yang dilakukan maka dapat disimpulkan bahwa pada hasil uji penguatan yang mencirikan hasil positif yaitu perubahan warna pada media EMBA menjadi hijau metalik dengan menggunakan sampel air laut dibelakang hotel kristal telah tercemar oleh bakteri E. coli. Hal ini dikarenakan pembuangan limbah hasil olahan dari hotel kristal langsung bermuara ke laut dibelakang hotel sehingga memungkinkan untuk tumbuhnya bakteri E. coli pada perairan disekitar belakang hotel kristal.

5.    Jawaban Pertanyaan

1.      Mengapa dalam pengujian mikrobiologi dilakukan dalam laminary air flow?

2.      Apakah beda antara autoklaf dan oven dalam hal penggunaannya pada proses sterilisasi?

3.      Mengapa ada pembedaan sterilisasi pada penyiapan pengujian mikrobiologi?

4.      Mengapa dalam pengenceran digunakan angka 10^-1, 10^-2 dan seterusnya?

5.      Mengapa EMBA digunakan sebagai media seleksi pada pengujian E. coli?

6.      Sebutkan karakteristik E. coli jika ditumbuhkan pada uji biokimia :

a.     Fermentasi karbohidrat

b.     Katalase

c.      Oksidase

d.     Uji IMVIC

Alat : autoklaf, oven, erlenmeyer, cawan petri, pipet volumetric, tabung reaksi, pipetor, rak tabung, kapas, aluminium foil, plastik wrapping, NaCl, aquades.